一、病原学检查
加热可疑食物、呕吐物或排泄物，煮沸20min接种血琼脂作为厌氧菌培养，发现致病菌，中毒创伤性肉毒杆菌，在血清中发现毒素或分离伤口，在厌氧条件下培养肉毒杆菌。
二、毒素试验
1.动物试验:将检查标本浸出液体喂养动物或豚鼠、小鼠腹腔注射，并设置对照组加热80℃30min在标本中加入混合肉毒杆菌毒素或抗毒素。如果试验组动物死于肢体麻痹，而对照组没有，则可以建立疾病的诊断。
2.中和试验:各种抗毒素血清0.5ml注射小白鼠腹腔，然后接种标本0.5ml，同时设置对照组，判断毒素和定型。
3.禽眼接种试验:根据禽类的大小，采用含有毒素的浸出液0.1～0.3ml在家禽眼内角以下的眼睑皮下注射眼睑闭合，或麻痹性瘫痪和呼吸困难，几十分钟到几小时后死亡，可作为快速诊断。
3、肌电图检查
肌纤维振动、单刺激反应减少、反复刺激电势增加、持续时间短、波幅小、多相运动、电势增加等特点，有病的诊断。
