一、生化变化
血钙，磷：佝偻病和骨程度不同，佝偻病和骨质软化症是否有继发性甲状腺机能亢进，其血钙和磷可能有以下六种变化：
(1)血钙减少，血磷正常或低，如轻度营养维生素D缺乏性佝偻病等。
(2)血钙正常或低，血磷明显减少，如X连锁低磷血症、肾小管和肿瘤性骨软化症。
(3)血钙和磷明显减少，如维生素D依赖性佝偻病Ⅰ类型和严重的维生素D缺乏性佝偻病伴继发性甲亢。
(4)血钙减少，血磷正常，如特发性甲旁减和肾性骨病(尿毒症性骨病)。
(5)血钙正常或升高，血磷正常，如家族碱性磷酸酶过少等。
(6)血钙、磷均正常，如中轴性骨质软化症、骨纤维不全症等。
尿钙，磷：佝偻病和骨质软化症的尿钙因各种原因不同，但绝大多数佝偻病和骨质软化症都有一个突出的特点，那就是24h尿钙明显减少，一般在50mg大约，有些甚至无法测量，少数骨细胞和骨质紊乱骨软化，尿钙可以正常或增加，尿磷变化不一致，与磷摄入和继发性甲状腺机能亢进有关。
3.血碱性磷酸酶（AKP）尿羟脯氨酸（HOP）：绝大多数佝偻病和骨质软化，血液AKP和24h尿HOP它们都很轻，中度往往与骨病变的严重程度有关，但家族碱性磷酸酶过少减少，干骺端发育不良和中轴性骨软化正常。
二、激素测定
1.甲状旁腺激素：虽然绝大多数佝偻病和骨质软化症患者都有补偿性甲状旁腺功能增加，但一般采用放免法测量PTH在正常范围内，少数患者伴有明显的继发性甲旁亢，可能有PTH水平轻，中度升高，特发性甲状旁腺低，PTH是降低的。
2.维生素D测定：维生素D确定佝偻病和骨质软化症的病因和类型非常重要，主要是测量血浆25-（OH）D3(正常值:国外7~50ng/m1，7~北京协和医院36ng/ml）和1，25-（OH）2D3(正常值:国外25~45pg/ml，北京协和医院21~62.4pg/m1），一般营养维生素D缺乏时，25-（OH）D3和1，25-（OH）2D3维生素均下降D依赖性佝偻病Ⅰ先天性或获得性肾类型1α-羟化酶活性降低引起的佝偻病25-（0H）D3正常，而1，25-（OH）2D3维生素水平降低D依赖性佝偻病Ⅱ型，1，25-（OH）2D3各种佝偻病和骨质软化实验室检查指标的变化(表2)水平增加。
三、X线的征象
一、佝偻病：主要病理变化发生在生长旺盛的地区，X线标志变化也主要在最快的干骺端，如股骨远端、肱骨近端、胫骨和尺骨末端。早期变化是临时钙化带模糊变薄，不规则甚至消失。干骺端首先膨胀变宽，形状不规则为刷状，然后中心凹陷为杯状。骨骺线增宽是正常儿童的5~10倍，骨骺缓慢，形状小，边缘模糊。
2.骨软化：轻度者只显示普遍骨密度降低，进一步发展可显示骨皮质变薄，密度降低为绒毛状，腰椎双凹变，典型者可显示Looser带（Milkman假性骨折)，是骨软化症之一X线性特征为双侧对称宽约1~5mm亮光带穿过骨区或位于长骨凹面，不完全跨越骨长径，与骨皮成直角，多发生在股骨颈、肋骨、尺骨、胫骨下端、肩胛骨下、髂翼、耻骨、坐骨支。目前，大多数人认为这种假骨折是由于反复微骨折后反复重建而无法钙化而形成的，部分也可能是由于动脉搏动或压力。在严重的情况下，
佝偻病或骨软化可有不同程度的继发性甲状腺机能亢进，表现为花边骨膜下骨吸收、耻骨联合和骶髂关节间隙加宽、指骨膜下骨吸收和指骨丛吸收、假杵指、成人骨软化也可见不典型囊透明区，典型骨囊肿罕见。
四、双光子骨密度检查
典型的佝偻病和骨软化症不难诊断，轻度骨软化症早期诊断困难，双光子骨密度检查可显示骨矿物质含量的减少和损失，缺点是不能区分矿物质损失是骨矿化不良、骨质疏松症或骨吸收增强，但确实可以作为骨软化治疗后恢复的评价指标，X线路检测更准确。
五、骨计量学检查
这是四环素双标记体内骨活检，然后用组织形态方法定量检测骨测量参数，是诊断佝偻病和骨软化的重要手段，特别是对于诊断不清楚、高度怀疑的患者，可为诊断提供令人信服的形态基础，佝偻病和骨软化诊断基础有三点：①骨质宽度增加。②矿化沉积率（MAR）下降，矿化延迟（MTT）明显延长。③骨表面被类骨覆盖的百分比增加，正常人骨完全矿化平均需要10~12天，骨宽7~15μm，骨骨覆盖骨小梁的表面约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约约12％，MAR为0.6～1.0μm/d，骨软化患者骨质宽度和骨质覆盖率显著增加，骨质宽度超过20μm，覆盖骨表面可增加到20％，虽然上述骨转化率高的疾病（又称非软骨病性骨增多症）也有骨增多，但骨宽正常或减少，骨转化率低，骨覆盖率显著降低，由于矿化不良，骨软化矿化前沿缩小和不规则，矿化成熟延迟，表现为四环素双标记线增厚、分布扩散、距离缩小和融合，由于骨软化骨小梁表面骨表面延长，骨增宽，红色染料容易进入骨组织，骨小梁可见粉色片染色，正常骨组织难以见。
通过细胞计数，我们可以了解到，由于活性维生素，活性骨质软化症的成骨细胞数量增加，细胞体大，呈立方形和柱状，这表明这些细胞覆盖的骨质是新合成的D缺钙，钙吸收减少，导致新合成骨不能矿化，但Paget氏骨病的骨构筑和板层骨结构发生紊乱，某些方面与甲旁亢相近，局部破骨细胞生成过多，骨吸收增加。
