夜盲症的诊断需要详细询问病史，如饮食、发烧和长期腹泻。检查结膜和角膜，注意结膜是否干燥、起皱Bitot斑点、角膜浊度、软化或穿孔。识别暗适应减少和眼睛干燥的原因，必要时进行暗适应和视网膜电流图检查。检查是否有全身性维生素A维生素缺乏等缺乏症状。
1.血浆维生素A含量测定:正常300～500μg/L，低于200μg/L为异常。
2.尿检:计数上皮细胞，如每立方毫米上皮细胞超过3个(尿路感染除外)，有助于诊断。
3.血浆视黄醛与蛋白质结合(RBP)测定:它能反应维生素A正常水平为40～50mg/L，儿童为23.1mg/L。
4.生理盲点的测定:生理盲点是判断维生素A一个比较敏感的营养指标，缺乏时生理盲点扩大，治疗后盲点缩小，视力恢复正常。
5.视网膜电流图:阈值同时发生变化b波变小。
6.暗适应测定:选择:Goldman-Weekers暗适应计，Feldman暗适应计或YA-Z型暗适应计均可，缺乏者暗适应能力下降，瞳孔对光反应迟缓。
7.结膜印痕细胞学检查:了解结膜杯状细胞密度的降低。
