1.将粪便分为二滴亚3min后镜检查,渗出性病变主要是多核白细胞,伤寒、过敏反应多为单核细胞。

旅行者腹泻应该做哪些检查?

       2.粪便培养病原体,虽然有多种抗粪术,但必要时可重复。过去,志贺菌和沙门菌的常规检测是不够的。除双硫和血琼脂培养基外,还应根据可疑致病菌选择相应的选择性培养基和培养条件、厌氧培养(如弯曲菌、难辨杆菌、产气荚膜杆菌等)、含有抗生素的选择性培养基(如弯曲菌)、碱性或盐培养基(如霍乱弧菌等),以及国内提出的冷增菌和碱化处理后的双硫平板检测。选择粪便中的脓液和粘液部分,及时接种疫苗;最好在患者服用细菌药物前使用多种特殊的培养基,在不同的情况下进行培养;选择细菌落作各种鉴定是改善阳性培养的关键。轮状毒可以成功分离,但程序繁琐,要求条件高,时间长,不能在普通实验室完成。

       3.大多数抗体检测系统(包括血凝抑制法,ELISA方法等),对病毒和细菌都有特异性。诺瓦克病毒的流行、轮状病毒和细菌的变化已经通过血清抗体滴度的变化来确定ETEC但免疫荧光对蓝氏贾第鞭毛虫抗体有交叉反应。

       4.检测肠毒素

       (1)生物学鉴定:乳鼠灌胃法鉴定:ST毒素(因其分子量过小,其他免疫诊断困难)、亲水气单胞菌肠毒素等。也可用于家兔肠环分泌试验(secretion in rabbit intestinal loops test)检测ST和LT肠毒素。

       (2)组织培养法:已能使用Y1肾上腺细胞,中国田鼠卵细胞(CHO)组织培养细胞,进行细胞毒素和LT肠毒素分类。

       (3)Biken试验:由Elek和Ouchtertory试验原理组成。琼脂板上产LT克隆能与抗霍乱抗血清形成沉淀线,区分肠毒素。

       5.病毒RNA凝胶电泳 病毒可直接从粪便标本中提取RNA,根据特点,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色法RNA电泳图谱,进行轮状病毒的分类与快速诊断。

       6.DNA分子杂交试验 以放射自显影放射性核素标记法,试用于轮状病毒的检测、EIEC同源肠毒素DNA检测编码基因等。

       7.DNA大肠毒素质粒。

       1.电镜检查ELISA虽然轮状病毒的检测远远超过了电镜检测,但电镜仍然需要其他腹泻病毒,如腺病毒和冠状病毒。可以观察隐孢子虫的结构和生命周期。电镜扫描可以获得肠道微生物的特殊形象,但程序太复杂。

       2. 包括免疫学检查ELISA、固相放射免疫法和反向被动凝血法。用于检测粪便中的细菌、病毒抗原和血清中的特异性抗体,特别是单克隆抗体,大大提高了灵敏度和准确性LT肠毒素、轮状病毒、婴幼儿腹泻病毒鉴定及阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫抗原、抗体等检测。

       3.气相色谱仪 已广泛应用于厌氧菌鉴定,如梭状芽孢杆菌快速诊断等。

       4.聚合酶链反应(PCR) 特殊扩展病原体的基因简单、快速、敏感,可直接用于粪便检测,无需培养。它是诊断传染性腹泻特别是病毒性腹泻病原体的理想技术。

       5.芯片技术 DNA芯片技术或基因芯片是指在核酸分子杂交配对的帮助下,将极大的探针分子固定在固相(玻璃或硅片)支撑物上DNA对样品的序列信息进行高通量、高效的解读和分析。

       (1)DNA芯片技术的特点是:

       ①微量化(最小上样量)0.25~1nl)。

       ②规模大、信息储量大(已有短阵排列高于100万种的寡核苷酸探针)。

       ③并行化(如30万个微矩阵排列的探针和1万个待测探针)DNA杂交,完成杂交)。

       ④高效、高自动化(由于信息容量大、矩阵排列、同时检测),操作和操作完全自动化,效率极高。

       (2)DNA芯片技术应用广泛,前景广阔,进展迅速。主要用于:

       ①DNA序列分析。

       ②基因突变、基因多态分析和肿瘤诊断。

       ③新药开发及组分筛选。

       ④分析基因差异表达和基因表达谱。

       ⑤实验诊断病原微生物和传染病。

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       6.T7放大核糖核酸聚合酶的免疫检测系统(IDAT) IDAT(immuno-detection amplified by T RNA polymerase),即T7核糖核酸聚合酶放大的免疫检测技术可以通过固定目标蛋白质(用信号显示它的存在)和抗体来刺激助催化剂T7特定定的核糖核酸分子(信号分子)为指示系统,激活和转录核糖核酸聚合酶。IDAT该方法具有极高的灵敏度(个蛋白质分子),操作简单(可自动化)。通用检测分子的进一步改进可以检测无限的蛋白质、脂质、糖和其他细胞分子。IDAT将生物芯片技术与蛋白质芯片技术相结合,将生物芯片技术推向一个新的水平。潜在应用于癌症早期发现、筛选新药和分子样本等重要领域。

       7.选择性捕获转录序列的分析系统(SCOTS) SCOTS技术由Graham和Clark-Curtiss1999年成立时,他们共同研究结核杆菌在人类巨噬细胞中的反应,发现和DNA许多与修复、营养代谢、转录调转录调节和毒力产生有关的基因。Morrow等联合应用SCOTS研究了巨噬细胞基因组中的一些操纵因素和转录调节因素。显然,使用SCOTS技术或与当代新的实验手段相结合,可以从基因组水平理解基因表达,揭示细菌等病原体进入身体、相互作用和感染机制,大大丰富研究内容,提高实验诊断水平。

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