大多数病例通过涂片、培养和组织病理学进行诊断。
1.直接镜检 血液、胸腔积液、痰液或其他分泌物是最简单、最快速的诊断方法双壁圆形可以在光镜下看到8～20μm单芽孢子大小，芽颈粗。活检标本的组织病理检查也是建立诊断的好方法，但需要做PAS特殊染色，如染色、六胺银染色等。
2.细菌培养 容易生长，但生长缓慢，常规培养需要几周。
3.皮肤试验 主要用于流行病学调查，目前尚无抗原临床使用。
4.血清学试验 有补体结合试验、免疫扩散法和酶免疫测定法，特异性高，敏感性差。
X肺病灶和(或)肺门、纵隔淋巴结可在线胸片上肿大。
