1.支原体分离培养 取新鲜清洁中间尿液，接种支原体培养基。在适当的培养条件下，支原体很容易分离。当发现菌落生长时，应进行同类特异性抗体抑制试验，以分类支原体。
2.血清学诊断试验 是诊断支原体感染的一种实用方法。抗原可以由支原体制成，并与患者的血清相结合。疾病后期血清相结合的抗体滴度是早期的4倍以上，具有诊断意义。
临床试验采用分子生物学诊断方法 MG全基因组的缺口翻译DNA探针、UU-rRNA特异的DNA探针及MH-rRNA基因探针等。利用DNA生殖道支原体感染被诊断为核酸印痕试验，其敏感性稍差(56％～63％)，但高特异性可以识别各种支原体甚至种间的生物型。为了弥补敏感性的不足，多聚酶链反应有助于诊断。
