支原体感染的实验室检查

       支原体感染可引起许多疾病。泌尿系统感染通常被称为非淋菌性尿道炎。支原体感染的实验室诊断主要是支原体的培养和血清鉴定。目前，基因诊断主要用于基因诊断。该病发病缓慢，症状不典型，本章将详细介绍支原体感染的实验室检查，帮助您尽快发现并及时治疗。
       1.支原体培养：
       a.收集标本，一般为泌尿生殖试验或刷片，少数前列腺液、精液、关节液、输卵管、直肠活检物，近年来使用初始尿标本离心物，取代尿道拭子。将拭子插入男性尿道2-4cm，用力擦拭。这种方法容易造成尿道损伤和继发感染。使用时要小心。女性需要先清洁宫颈鳞状和柱状上皮的结合部，用细胞刷收集宫颈标本，这样可以增加感染细胞的数量，比棉拭子更敏感。
       b.牛心浸液或蛋白质蛋白质是常用的培养基1％新鲜酵母浸液，10-20％动物血清及0.5％还可以添加葡萄糖和精氨酸来促进氯化钠MH和MG生长，添加尿素UU代谢，适量添加青霉素抑制杂菌。
       2.血清学鉴定法：最常用的是琼脂扩散法，即将支原体接种到琼脂容器上。然后在琼脂表面使用浸泡过适量血清的滤纸，观察哪一种可以抑制支原体的生长。琼脂表面的菌落也可用作荧光抗体染色法和落射荧光显微镜。该方法的优点是，它可以利用琼脂表面最初生长的菌落而不代替支原体。
       血清学诊断试验：酶联免疫吸附试验(ELISA)高敏感性：微量免疫荧光法(MIF)具有快速特点。
       3.基因诊断：利用DNA探针对支原体的诊断敏感性稍差，但特异性高，用聚合酶链反应(PCR)，敏感性、特异性均高。具体检测方面如下：
       (1)标本处理
       1.取材为宫颈管，男性为尿道，将灭菌白金耳深入宫颈管或尿道1cm左右转动数圈，停留约30s，取出后标本缓冲液。
       2.解脲脲原体DNA提取：
       宫颈管或尿道内的刮取物0.5％NP-40、0.5％Tween20，1％SDS和2mg/ml蛋白酶K的TES缓冲液(50mmol/L Tris-HCl，50mmol/L NaCl，100mmol/ L EDTA，pH 8.0)，置37℃裂解60 min，沸水5min，酚，氯仿抽提DNA乙醇沉淀，沉淀物溶于20μl TE缓冲液(100mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA，pH 8.0)。
       (2)引物设计
       引物来自解脲脲原体，脲酶基因序列：
       UU1：CAGATACATTAAACGAAGCAGG(1613-1635)
       UU2：GTGGTGACATACCATTAAC(1837-1819)
       (3)PCR扩增
       传统方法的反应体积是100μl，含5x反应缓冲液20μl和FD-DNA聚合酶2μ、4种dNTP各200μmol/L引物对各25pmol/L。上述成分提前一次性分装0.5ml离心管，-20℃备用。临用加模板DNA 2μl，短暂离心，加100μl矿物油覆盖。目前试剂已商业化，反应体积为25μl，单管已经分装好了，只要加模板DNA即可。置DNA扩增器进行40次循环扩增。每个循环包括90℃变性45s(第一次循环变性2min)，55℃退火30s和72℃延伸40s(最后一个循环72℃，延伸5min)三个步骤。每次扩要阴阳对照。
       (4)扩展产品的检测
       1.5％琼脂糖凝胶电泳:10u l PCR扩增物作1.5％琼脂糖凝胶电泳，0.5μg/ml溴化乙锭染色，以PGEM-3Zf(+)DNA-Hae Ⅲ紫外线透射器观察结果为分子量标准。
       专家建议患者加强户外体育锻炼，提高抗病能力；始终注意天气变化，根据温度，及时增加或减少衣服；通常多喝沸水，多吃营养丰富的食物；如果条件允许，最好接种疫苗。